高效液相色谱法与二氯靛酚法测定红阳猕猴桃维生素C含量的研究

魏明英

（ju999.net ，四川 都江堰 611830）

摘  要：本文采用2，6－二氯靛酚法和高效液相色谱法对红阳猕猴桃维生素C含量的测定进行了系统研究，结果表明2，6－二氯靛酚法测定红阳猕猴桃维生素C时滴定终点难以准确判断，无法得到准确结果，高效液相色谱法对红阳猕猴桃维生素C含量的测定结果精密度高，但准确度低。

关键词：红阳猕猴桃，维生素C，高效液相色谱法, 2，6－二氯靛酚法

Determination of Vitamin C in Red Sun Kiwifruit by HPLC and Methylene Chloride Indigo Phenolic Spectrometry

WEI Ming-ying

(College of Sichuan Technology and Business, Dujiangyan 611830)

Abstract: Determination of vitamin C in red sun kiwifruit by HPLC and methylene chloride Indigo phenolic spectrometry. The result showed that end-point of titration is difficult to be judge,by methylene chloride Indigo phenolic spectrometry .The project team can’t obtain The accurate result. The precision of HPLC is high, but accuracy is Low.

Key words: red sun kiwifruit; vitamin C; HPLC; methylene chloride Indigo phenolic spectrometry.

红阳猕猴桃是世界珍惜猕猴桃品种，其果实子房鲜红色，果肉程黄绿色，横切面呈红、黄、绿相间图案，极为美观，具有刺激食欲的价值[1,2];营养丰富，品质优良；肉质细嫩，汁多味浓，纯甜浓香，常食红阳猕猴桃有防癌抗癌排毒养颜等保健功效。红阳猕猴桃鲜食、加工均可，是加工工艺菜肴的上等原料，也是酿制高档果酒果醋和生产果汁和其他休闲食品的绝佳原料。目前，红阳猕猴桃的消耗以贮藏鲜食为主，果酒、果片、果汁饮料产量日益增大。维生素C是红阳猕猴桃的重要营养成分，贮藏、加工过程中均十分重视对VC的保存，但是红阳猕猴桃VC含量的测定目前还没有较准确的方法报道，本文采用2，6－二氯靛酚法和高效液相色谱法对红阳猕猴桃维生素C含量的测定进行了系统研究。

1、实验材料与方法

1.1实验材料和仪器

红阳猕猴桃：由成都青牛农业有限公司提供

甲醇，色谱纯；磷酸，分析纯；还原性VC,分析纯；其余实验所用试剂均为国产分析纯级。

TB-215D精密电子天平：赛多利斯；高效液相色谱仪: Agilent/安捷伦,1100型，配紫外检测器。

1.2实验方法

1.2.1 2，6－二氯靛酚法测定还原性VC

2，6－二氯靛酚法样品预处理方法：称200g红阳猕猴桃加200ml 1%草酸溶液，倒入捣碎机中打成匀浆，取20g匀浆倒入100ml容量瓶中，用1%草酸溶液稀释定容，混匀，加入白陶土10g混匀，进行脱色，过滤，弃去初滤液，收集滤液以2，6－二氯靛酚法测定还原性VC含量[3]。

1.2.2 高效液相色谱法[4-6]

色谱条件：色谱柱，ODS C18 250 mm x 4.6 mm x 5 um；紫外检测器波长：240nm；流动相：不同pH的甲醇溶液；流速：1.0ml/min;柱温25℃；进样量25ul。

流动相：浓度为pH3.0的30%（v/v）甲醇溶液，用磷酸调节pH。

维生素C标准溶液配制：称取VC标准样品0.1ｇ，用0.001 mol/L盐酸溶液溶解并定容至100mL，浓度为1.0mg/ml，并过滤脱气，备用。

标准VC系列溶液：取浓度为1.0mg/ml VC标液用0.001mol/L盐酸溶液做溶剂配制出各稀释液浓度为10、20、30、40、50ug/ml的系列溶液，并过滤脱气，备用。

样品处理：准确称取一定量样品，加入0.001 mol/L盐酸溶液，捣碎，离心，上清液经0.45um滤膜过滤后，按上述色谱条件进样25ul，平行测定5次，以外标法定量。

2、实验结果

2.1 2，6－二氯靛酚法测定还原性Vc

还原性Vc提取液颜色为红色，以白陶土脱色后，颜色仍为淡粉红色，其颜色与2，6－二氯靛酚法滴定终点的粉红色无显著差异，实验人员难以判断滴定终点，因此本法未得到红阳猕猴桃还原性Vc的含量。

2.2  高效液相色谱法测定红阳猕猴桃还原性VC含量

2.2.1色谱分析条件选择

实验结果表明，用紫外检测器，波长为240nm；浓度为pH3.0的30%（v/v）甲醇溶液为流动相获得的还原性VC标准样品色谱图效果较其余流动相效果好，以0.001mol/L的盐酸为溶剂，浓度为50ug的还原性VC的色谱图如图1所示，样品色谱图如图2。

                            图1 50ug/ml的VC标样色谱图

                       图2 红阳猕猴桃VC高效液相色谱图

2.2.2标准曲线制作

取浓度为10、20、30、40、50ug/ml的系列标准溶液分别进样25ul液相色谱仪，测定标准吸收曲线。标准系列溶液浓度对峰面积结果见表1所示，绘制标准曲线如图3所示。

表1  高效液相色谱法VC标准曲线

图3 维生素C的标准曲线

2.2.3红阳猕猴桃维生素C测定

将红阳猕猴桃维生素C提取液按上述色谱条件进样25ul，平行测定6次，以外标法定量，测定结果见表2 。

表2   红阳猕猴桃维生素C测定的精密度

2.2.4红阳猕猴桃维生素C回收率测定

    样品回收率实验结果见表3所示。从回收率可以看出，高效液相色谱法测定VC时回收率较低。

表3  红阳猕猴桃VC高效液相色谱法回收率实验

3 结论

本项目分别采用了2，6－二氯靛酚法和高效液相色谱法，结果表明，2，6－二氯靛酚法因红阳猕猴桃维生素C提取液颜色为粉红色，采用白陶土对提取液处理后提取液颜色仍为浅粉红色，导致样品提取液颜色和滴定终点颜色难以区分，使滴定终点难以准确判断。高效液相色谱法测定红阳猕猴桃维生素C结果精密度高，但是回收率低，分析原因，由于红阳猕猴桃是浆果，预处理超滤时速度极慢，与空气接触接触时间长，导致维生素C损失率高，使测定结果偏小。2，6－二氯靛酚法和高效液相色谱法在测定红阳猕猴桃维生素C时都部分受限，无法准确测定出维生素C的含量，但高效液相色谱法所得维生素C的测定条件能较准确的测定非浆果类原料的维生素C。根据红阳猕猴桃在采用2，6－二氯靛酚法和高效液相色谱法中呈现出的现象问题，可推测红阳猕猴桃维生素C含量采用荧光分光光度法能准确测定。

参考文献

[1]吕岩.红阳猕猴桃主要特点[J].西北园艺，2001（3）：37-38. 

[2]珍惜品种—红阳猕猴桃[J].世界农业，2003（2）：52

[3]朱克永.食品检测技术 理化检验 感官检验技术[M].北京：科学出版社，2011.

[4]张秀梅等. 高效液相色谱法测定菠萝果实维生素C含量[J]. 福建果树.2007,140（1）：20-22.

[5]黄力，张宝川.HPLC法测定多维片中的水溶性维生素[J].中国药事，2007,21（4）：255-257.

[6]王爱月，张向兵，李发生.高效液相色谱法测定食品及保健品中维生素C含量的研究[J].中国卫生检验杂志，2006,16（10）：1175-1176.